茵衣藻是一種模型綠色微藻，能夠利用醋酸異養(yǎng)生長(zhǎng)。盡管含有完整的β氧化基因，但不能在脂肪酸上生長(zhǎng)。最近的報(bào)道表明，藻類優(yōu)先隔離而不是分解脂酰鏈，來(lái)用作快速重建膜。我們收集了一系列過(guò)氧化物酶體生物發(fā)生所需的潛在衣藻過(guò)氧化物素（PEXs），以表明萊茵衣藻具有一套完整的過(guò)氧化物酶體生物發(fā)生因子。為了確定過(guò)氧化物酶體參與外源性脂肪酸的代謝，我們檢測(cè)了在不同營(yíng)養(yǎng)條件下表達(dá)與過(guò)氧化物酶體蛋白N端或c端肽融合的熒光蛋白，同時(shí)加入熒光標(biāo)記的棕櫚酸。在光照和黑暗，有或者沒(méi)有乙酸作為碳源的條件下，使用共聚焦顯微鏡跟蹤過(guò)氧化物酶體。在細(xì)胞中，鑒定了四個(gè)主要的隔間，包括： (1)乙醛酸循環(huán)酶標(biāo)記和含有過(guò)氧化物酶體靶向信號(hào)1（PTS1）三肽但缺乏脂肪酸標(biāo)記，(2)脂肪酸標(biāo)記，(3)乙醛酸循環(huán)酶標(biāo)記，(4)PTS1標(biāo)記。不到5%的隔間同時(shí)含有脂肪酸和過(guò)氧化物酶體標(biāo)記物。對(duì)光學(xué)切片圖像的統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，萊茵衣藻在細(xì)胞中同時(shí)攜帶不同的過(guò)氧化物酶體群體，并根據(jù)光照條件調(diào)節(jié)過(guò)氧化物酶體的含量。另一方面，無(wú)論培養(yǎng)條件如何，同時(shí)含有脂肪酸和過(guò)氧化物酶體標(biāo)記物的隔室的比例都沒(méi)有顯著變化。結(jié)果表明，β-氧化在萊茵衣藻的過(guò)氧化物酶體群體中可能發(fā)生率較小，這支持了藻類中脂肪酸的主要代謝偏好是脂質(zhì)生物合成而不是β-氧化的觀點(diǎn)。

纖細(xì)裸藻能積累大量的β-1,3-葡聚糖，并線性聚合形成顆粒狀的副淀粉作為貯藏多糖。纖細(xì)裸藻在無(wú)氧條件下快速分解副淀粉并將其轉(zhuǎn)化為蠟酯產(chǎn)生ATP。早期研究已在纖細(xì)裸藻中鑒定出存在三種主要的β-1,3-葡聚糖酶，但目前尚不清楚這些酶是否主要負(fù)責(zé)副淀粉的降解過(guò)程。在本研究中，我們首先證明了這些已知的β-1,3-葡聚糖酶不是無(wú)氧副淀粉降解所必需的，然后進(jìn)行了功能蛋白質(zhì)組學(xué)和反向遺傳學(xué)分析，以確定負(fù)責(zé)副淀粉降解的酶。對(duì)從分離的副淀粉中提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)兩種內(nèi)切葡聚糖酶（EgENG1A和EgENG2）和一種層狀糊精磷酸化酶（EgLDP1）是潛在的副淀粉降解酶。此外，基于生物信息學(xué)對(duì)這些酶同源蛋白的鑒定表明，在副淀粉降解過(guò)程中，還有一種葡聚糖酶（EgENG1B）和兩種磷酸化酶（EgLDP2和EgP1）參與。同時(shí)敲除任意2~3個(gè)內(nèi)切葡聚糖酶基因均可顯著延緩副淀粉在無(wú)氧條件下的降解。兩個(gè)編碼層狀糊精磷酸化酶基因的敲除細(xì)胞系dKD-ldp1/p1在副淀粉合成和降解方面表現(xiàn)出比單敲除細(xì)胞系更為顯著的表型，表明EgLDP1和EgP1共同調(diào)節(jié)副淀粉代謝。這些結(jié)果清楚地表明，在本研究中確定的葡聚糖酶和磷酸化酶在無(wú)氧條件下的大量副淀粉降解中發(fā)揮作用。

根據(jù)光合作用是否產(chǎn)氧，可分為不產(chǎn)氧光合細(xì)菌和產(chǎn)氧光合細(xì)菌;又可根據(jù)光合細(xì)菌碳源利用的不同，將其分為光能自養(yǎng)型和光能異養(yǎng)型，前者是以硫化氫為光合作用供氫體的紫硫細(xì)菌和綠硫細(xì)菌，后者是以各種有機(jī)物為供氫體和主要碳源的紫色非硫細(xì)菌。
產(chǎn)品分類液體菌劑以有機(jī)、無(wú)機(jī)原料培養(yǎng)液接種光合細(xì)菌，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)而成的光合細(xì)菌菌液。
固體菌劑由某種固體物質(zhì)作為載體吸附光合細(xì)菌菌液而成。
施用方法生產(chǎn)的光合細(xì)菌肥料一般為液體菌液，用于農(nóng)作物的基肥、追肥、拌種、葉面噴施、秧菌蘸根等。
作種肥使用，可增加生物固氮作用，提高根際固氮效應(yīng)，增進(jìn)土壤肥力。
葉面噴施，可改善植物營(yíng)養(yǎng)，增強(qiáng)植物生理功能和抗病能力，從而起到增產(chǎn)和改善品質(zhì)的作用。
作果蔬保鮮劑，能抑制病菌引起的病害，對(duì)西瓜等的保存有良好的作用。光合細(xì)菌防止病害的主要原因是因?yàn)樗哂袣⒕饔?，能抑制其他有害菌群及病毒的生長(zhǎng)。
此外，在畜牧業(yè)上應(yīng)用于飼料添加劑，畜禽糞便的除臭，有機(jī)廢棄物的處理上均有較好的應(yīng)用前景。
由于光合細(xì)菌應(yīng)用歷史比較短，許多方面的應(yīng)用研究還處在初級(jí)階段，還有大量的、深入的研究工作要做。尤其是這一產(chǎn)品的質(zhì)量、標(biāo)準(zhǔn)以及進(jìn)一步提高應(yīng)用效果等方面基礎(chǔ)薄弱，有待進(jìn)一步加強(qiáng)。目前的研究和試驗(yàn)已顯示出光合細(xì)菌作為重要的微生物資源，其開發(fā)應(yīng)用的前景是廣闊的，必將具有不可替代的應(yīng)用市場(chǎng)，在人類活動(dòng)中必將發(fā)揮越來(lái)越大的作用。

光合細(xì)菌簡(jiǎn)稱PSB是在厭氧條件下, 能夠進(jìn)行不放氧光合作用的一類細(xì)菌的總稱。屬于水圈微生物的一種, 廣泛分布于水田、池塘及江河湖海中,尤其在有機(jī)物污染的積水(如糞便、堆肥污水等)處較多。光合細(xì)菌包括綠硫細(xì)菌、紅硫細(xì)菌、紅螺菌三個(gè)科, 其中紅螺科的一些屬(如紅假單胞屬)能在厭氧光照、好氧黑暗條件下迅速利用低分子有機(jī)物, 故可用來(lái)處理有機(jī)廢水。

2.研究概況

自60年代起, 日本小林正泰等首先進(jìn)行了用PSB菌處理有機(jī)廢水方面的研究, 先后成功地利用光合細(xì)菌對(duì)糞尿、食品行業(yè)污水、淀粉生產(chǎn)污水、皮革及以豆制品生產(chǎn)中所產(chǎn)生的有機(jī)廢水進(jìn)行了處理, 取得了成功的經(jīng)驗(yàn)。近年來(lái)中國(guó)也已對(duì)高合成脂肪廢水、豆制品、洗毛廢水及檸檬酸、味精等中、高濃度廢水進(jìn)行了研究和成功運(yùn)作。而且不僅采用PSB占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的活性污泥法, 同時(shí)采用制用載體進(jìn)行接觸氧化法的運(yùn)作也取得了較大的成功。在利用PSB處理高濃度廢水如味精廢水經(jīng)過(guò)三段接觸氧化法, 利用PSB菌群, 將COD從幾萬(wàn)降至2-3千mg/L不僅突破了傳統(tǒng)的采用厭氧處理后才能將COD從幾萬(wàn)降至幾千的做法, 同時(shí)將作為一種優(yōu)勢(shì)菌與其它優(yōu)勢(shì)菌結(jié)合, 可以廣泛應(yīng)用在食品、印染、制革、造紙等具有可生化性能的污水處理上。

3.PSB處理有機(jī)廢水的原理

從廢水中分離出來(lái)的PSB是紅螺菌科的一些細(xì)菌種, 其細(xì)胞可進(jìn)行光合磷酸化和光氧化還原反應(yīng), 在好氧黑暗條件下, 紅螺菌缺少這種載色體, 此時(shí)它通過(guò)三梭酸循環(huán)來(lái)進(jìn)行有機(jī)酸代謝, 但當(dāng)轉(zhuǎn)變成厭氧光照時(shí)又很快形成載色體。這種隨生長(zhǎng)條件變化而靈活地改變代謝類型的特性, 使PSB在厭氧光照、黑暗好氧、明亮好氧的條件下均可降解有機(jī)物, 而且它所要求的條件也不像一般的專屬好氧菌和專屬厭氧菌那樣嚴(yán)格。由于在好氧條件下產(chǎn)酸的速率明顯高于厭氧產(chǎn)酸的發(fā)酵的速率, 且PSB生長(zhǎng)較快, 分解能力較大, 故在好氧設(shè)施使用PSB降解有機(jī)物更為有利, 它不僅比單一的專屬細(xì)菌具有較高生長(zhǎng)率, 同時(shí)在不同環(huán)境條件下都能發(fā)揮其特殊的作用。對(duì)于酸化水解工藝加上好氧曝氣處理有機(jī)廢水來(lái)源, 通過(guò)兼性厭氧菌的作用將長(zhǎng)鏈有機(jī)物轉(zhuǎn)化成低級(jí)脂肪酸等小分子有機(jī)物, 再在好氧條件下, PSB生物降解有機(jī)物的能力比常規(guī)的好氧菌具有較高的處理效率, 它將使好氧生化池的容積大幅度減小, 降低工程投資, 具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

PSB與其它菌種共同生存時(shí)同樣具有較高的優(yōu)勢(shì)。在自然水體中紅螺菌是與其它養(yǎng)菌共生的, 而且有機(jī)物越多的地方如魚塘、沼澤、淤泥堆積等地,紅螺菌會(huì)更多, 因此只要廢水中的水質(zhì)、溶解氧、停留時(shí)間合適, 光合細(xì)菌就會(huì)保持一定的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng), 在生化反應(yīng)池中的微生物菌群與降解過(guò)程中相應(yīng)的微生物菌群交替演繹使得生物降解在更高的狀態(tài)下進(jìn)行。因此, 只要投加的菌種是生物降解所必需的, 或能協(xié)同降解有機(jī)物的微生物, 均可使PSB菌處于一種高效的狀態(tài), 提高處理效果。

4.處理有機(jī)廢水的特點(diǎn)

a、處理中低濃度的廢水時(shí), 同樣具有處理高濃度有機(jī)廢水的特點(diǎn),BOD 負(fù)荷高?？筛哌_(dá)5kg/m3·d以上, 同時(shí)由于投加了其它菌種, 同樣具有一般接觸氧化法的特點(diǎn), 出水BOD很低。

b、耐沖擊負(fù)荷,BOD 負(fù)荷大幅變化, 出水處理效果不受影響。

c、重新運(yùn)行靈活

在將PSB菌進(jìn)行接觸氧化法時(shí), 不需污泥回流, 吸附在載體上時(shí), PSB菌種生長(zhǎng)性能好, 重新檢修時(shí), 恢復(fù)正常運(yùn)行啟動(dòng)較快。

e、PSB耐高鹽分, 是一種可降解油脂、脫硫、脫氮、脫磷的廣譜細(xì)菌, 在和不同的細(xì)菌協(xié)同作用下,可以處理多種有機(jī)廢水。

f、對(duì)溫度變化不敏感, 在低溫狀態(tài)下, 仍然能達(dá)到一定的處理效果。

g、污泥量少, 易于分離。作用于載體上時(shí), 污泥量比單純的活性污泥法的污泥產(chǎn)量大幅度減少。

5.結(jié)論

光合細(xì)菌在污水處理中, 能有效地提高處理效率, 它不僅對(duì)高濃度有機(jī)廢水水質(zhì)具有良好的處理效果, 而且與其它優(yōu)勢(shì)菌協(xié)同處理低濃度廢水時(shí)同樣能取得較理想的效果, 而且能降低基建投資, 減少運(yùn)行成本。是具有實(shí)用價(jià)值的處理方式。

1.?在水產(chǎn)養(yǎng)殖和畜禽養(yǎng)殖領(lǐng)域的應(yīng)用。凈化養(yǎng)殖塘水質(zhì)。PSB可以抑制綠藻等有害微生物的生長(zhǎng)，降解有害有機(jī)物，增加水體氧氣，減少水生動(dòng)物的病害。作為水產(chǎn)養(yǎng)殖和畜禽養(yǎng)殖的飼料或飼料添加劑。PSB蛋白質(zhì)含量>60%，并含有16種氨基酸，各種B族維生素、促生長(zhǎng)因子、輔酶Q、抗病毒因子和色素等，是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的飼料或飼料添加劑。這種飼料是一種典型的單細(xì)胞蛋白（SCP）。水產(chǎn)養(yǎng)殖用每畝水面每次投放10升（凈化水質(zhì)用1-3次，魚飼料用應(yīng)多少投放），飼料或添加劑用按1-3%添加到動(dòng)物飼料或飲水中。

2.?在種植業(yè)上的應(yīng)用。PSB作為微生物肥料增強(qiáng)作物的光合作用，改良土壤，提高作物的固氮能力，促進(jìn)生根、花芽形成、果實(shí)膨大和作物早熟，提高作物抗毒、抗病能力。此項(xiàng)應(yīng)用一般用清水稀釋20倍后，噴灑葉面、噴灌滴灌、澆根、浸根均可。

3.?污水、垃圾的凈化和除臭。在養(yǎng)殖中，由于密度大，大量的飼料投喂和動(dòng)物糞便的排泄，加上其他工業(yè)、居民生產(chǎn)生活也產(chǎn)生高濃度的廢水，給環(huán)境造成極大負(fù)擔(dān)。PSB處理污水效果好，連續(xù)投放三次，間隔一周，每次每畝投放20升，可以達(dá)到污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)。垃圾除臭采用噴灑處理。

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光合細(xì)菌

光合細(xì)菌適宜生長(zhǎng)在15℃—40℃的環(huán)境中，有半環(huán)狀、桿狀、球狀、螺旋狀等多種形態(tài)。光合細(xì)菌雖不含葉綠體，但含有類似葉綠體的結(jié)構(gòu)，在此結(jié)構(gòu)中有葉綠素、菌綠素、輔助色素類胡蘿卜素和藻膽素等細(xì)菌光合色素，這些色素是光合細(xì)菌進(jìn)行光合作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。

光合細(xì)菌菌體無(wú)毒且營(yíng)養(yǎng)豐富，含有65.45%蛋白質(zhì)，7.18%脂肪，2.78%粗纖維和20.31%可溶性糖。PSB菌體還含有豐富的B族微生物（其中維生素B12含量是酵母的200倍）和16種人體必需氨基酸、泛酸、葉酸等。除此之外，還含有抗病毒物質(zhì)、促生長(zhǎng)因子和輔酶Q等多種生理活性物質(zhì)，尤其是輔酶Q含量分別為酵母、菠菜葉和玉米幼芽的13倍、94倍和82倍。光合細(xì)菌也因此被開發(fā)成多種保健食品。據(jù)美國(guó)商務(wù)部透露，僅1992年, 美國(guó)保健品中約有5.5% ~ 6.5%的品種加有不同比重的光合細(xì)菌菌液；日本生物化學(xué)工業(yè)公司生產(chǎn)的一種紫色光合細(xì)菌保健食品還申請(qǐng)了專利。

由于以煤焦油系為主要成分的合成色素具有致癌性，天然色素的開發(fā)引起了廣泛關(guān)注。光合細(xì)菌含有的類胡蘿卜素是一種用途非常廣泛的功能色素，在用作食品添加劑的同時(shí)還可起到抗氧化的保健作用。采用光合細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)的類胡蘿卜素?zé)o毒、色彩鮮艷，目前已被廣泛應(yīng)用于油脂類、豆制品、冰淇淋、糕點(diǎn)以及飲料等的著色。

此外，光合細(xì)菌還可作為優(yōu)良的水質(zhì)改良劑和飼料添加劑應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖和畜禽飼養(yǎng)上。

上海光語(yǔ)生物科技有限公司提供的光合細(xì)菌培養(yǎng)設(shè)備和技術(shù)，可以幫助企業(yè)獲得純正的光合菌，而不是市面買來(lái)的攙和了色素的偽劣產(chǎn)品。歡迎來(lái)電咨詢。

經(jīng)典的紫色非硫細(xì)菌（紅螺菌）的富集培養(yǎng)基的配方為：NH4Cl：0.1g；?NaHCO3：0.1g；K2HPO4：0.02g；CH3COONa：0.1~0.5g；MgSO4·7H2O：0.02g；?NaCl：0.05～0.2g；?生長(zhǎng)因子1ml，蒸餾水97ml，微量元素溶液1ml，pH為7.0。

其中，①5％NaHCO3水溶液，過(guò)濾除菌取2m1加入無(wú)菌培養(yǎng)基中。②生長(zhǎng)因子：維生素B10.001mg、乙尼克丁酸0.1mg、對(duì)氨基苯甲酸0.1mg、生物素0.001mg，以上藥品溶于蒸餾水中，定容至10ml，然后過(guò)濾除菌。③微量元素溶液：FeCl3·6H2O?：5mg；CuS04·5H2O：0.05mg；H3BO4lmg；MnCl2·4H2O：0.05mg；ZnSO4·7H2O：1mg；Co(NO3)2·6H2O：?0.5mg。以上藥品分別溶于蒸餾水中，并定容至1000m1。

除①、②、③外，各成分溶解后100?Pa滅菌20min。然后分別加入①、②、③，如加入0.1％～0.3％的蛋白胨則能促進(jìn)該菌生長(zhǎng)。

2、分離培養(yǎng)基：

傳統(tǒng)的紅螺科分離培養(yǎng)基的配方為：NH4Cl：0.1g；?MgCl2：0.02g；?酵母膏：0.01g；?K2HPO4：0.05g；?NaCl：?0.2g；?瓊脂2g，蒸餾水90ml。100Pa滅菌20min。

滅菌后，無(wú)菌操作加入經(jīng)過(guò)濾除菌的0.5g/5mlNaHCO3，再無(wú)菌加入過(guò)濾除菌的0.1g或0.1mlNa2S·9H2O（降低培養(yǎng)基的氧化還原值），最后再加入5ml經(jīng)過(guò)濾除菌的乙醇、戊醇或4％丙氨酸。用過(guò)濾滅菌的0.1mol/H3PO3調(diào)pH至7.0。

3、篩選富集培養(yǎng)基

? ? ? ? ? ?NH4Cl?1g/L,?NaHCO3?1g/L,?CH3COONa?3g/L,?KH2PO4?0.3g/L,?MgSO4?0.1g/L,?酵母膏0.5g/L,?微量元素母液1g,?自然pH值。擴(kuò)大培養(yǎng)培養(yǎng)基以海水代替微量元素母液。1000~4000lx光照,?(30±2)℃恒溫培養(yǎng)。

參考文獻(xiàn)：固定化海洋光合細(xì)菌處理生活污水的研究*???黃寶興,李蘭生,趙亮,張微,唐迎迎????海洋湖沼通報(bào)

4、基礎(chǔ)培養(yǎng)基

NH4Cl:1g;?Na2HPO4:?0.5g;?MgSO4:?0.2g;?NaCl:?2g;?NaHCO3:?5g;?酵母膏:2g?;?乙醇2ml，用?0.1N?H3PO4調(diào)至pH7.0。

劃線培養(yǎng)基:采用固體瓊脂培養(yǎng)基，即在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加1.0%的瓊脂。

以上培養(yǎng)基初始pH值均用H3PO4調(diào)至7.0，經(jīng)121℃滅菌30分鐘，NaHCO3過(guò)濾除

菌后加入。培養(yǎng)條件:光照培養(yǎng)箱溫度控制在30℃、光照強(qiáng)度控制在?3000uE.m-2s-1培養(yǎng)。

光合細(xì)菌是一種兼性嫌氣細(xì)菌，需要深層培養(yǎng)或在真空干燥器內(nèi)達(dá)到嫌氣或半嫌氣狀態(tài)，一般將混合菌放入培養(yǎng)液中先富集再分離。具體方法:將混合菌裝入?10ml試管中，加入培養(yǎng)液充滿至刻度，蓋上膠塞，在光照條件下保持在30℃左右培養(yǎng)。待培養(yǎng)液出現(xiàn)紅色后，取培養(yǎng)液加1.5%的瓊脂，制成固體培養(yǎng)基，取菌液分別用無(wú)菌水以10-100000000倍稀釋，分別取lml樣本涂在平皿上，光照、30℃培養(yǎng)2d左右在平板上長(zhǎng)出菌落。移至平板采用劃線法進(jìn)行分離，將劃好線的平板倒置，在相同條件下培養(yǎng)，反復(fù)分離純化，挑取不同特征的菌落，用斜面保存，純化分離后的菌種置于冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

PSB?培養(yǎng)中除碳、氮、磷等主要營(yíng)養(yǎng)元素外，還需要一定量的鎂、鈣、鈉和有關(guān)的微量元素，將所需的營(yíng)養(yǎng)元素按一定的比例配成適于菌體生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)室采用酵母膏、蛋白胨培養(yǎng)基，基本配方為:CaCl2?0.3g，MgSO4·7H2O?0.5g，酵母膏3g，蛋白胨3g，蒸餾水1000ml，pH:?6.8.?如需制固體培養(yǎng)基再加2%瓊脂。培養(yǎng)溫度：25℃～30℃最佳，光照強(qiáng)度：2000LX～5000LX，PH：7.5～8.5最佳。

把菌種接種到滅好菌的培養(yǎng)基中，在三角瓶中進(jìn)行二級(jí)培養(yǎng)，每天搖晃幾次。把?40L?的反應(yīng)器中加滿自來(lái)水，放入通氣管，蓋上保鮮膜一起用次氯酸殺菌消毒24小時(shí)，用硫代硫酸鈉（1L次氯酸需要150g硫代硫酸鈉）來(lái)中和。以15%的接種量接入反應(yīng)器中，用泵通氣培養(yǎng)，用分光光度計(jì)跟蹤測(cè)量菌液的密度，得到菌液的密度較高，而且反應(yīng)器還可以進(jìn)一步放大。

5、細(xì)菌生長(zhǎng)培養(yǎng)基

NaCOOH3.0g.酵母膏3.0g，NH4CL2.0g，KH2PO4 0.5g，天然海水1000ml，高溫滅菌。

100ml具塞容量瓶中裝有50ml光合細(xì)菌培養(yǎng)基，按10%接種量接種母液（約每毫升10億個(gè)細(xì)胞）混合均勻后置于恒溫光照培養(yǎng)箱中光照厭氧培養(yǎng)，光強(qiáng)2500Lux，溫度30攝氏度。

6、HCH光合細(xì)菌培養(yǎng)基

滅菌條件

（1）高壓蒸汽滅菌?小件玻璃器皿、培養(yǎng)基等采用濕式高壓蒸汽滅菌。這種滅菌方式可以達(dá)到徹底的滅菌。滅菌條件：0.103?MPa，120?℃，20min。

（2）紫外滅菌?無(wú)菌操作臺(tái)采用紫外滅菌方式，用紫外燈滅菌?30min。該種方式對(duì)空氣進(jìn)行滅菌。

光合細(xì)菌的純培養(yǎng)

本課題研究所用光合細(xì)菌為?Z08，除特殊說(shuō)明外，皆是由純培養(yǎng)獲得。將?50?mL?HCH?培養(yǎng)基灌裝于?250?mL?三角瓶，用封口膜將瓶口密封，以防止灰塵和雜菌進(jìn)入。灌裝好的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌?20?min。待冷卻以后，在無(wú)菌操作臺(tái)中接種?OD660=1.0（干重?840?mg/L）的?Z08?15?mL。接種后將菌液放置在?140?rpm?的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)，控制溫度?30?℃，24?h?照明，照度?500—1000?lx，培養(yǎng)?48?h?達(dá)到穩(wěn)定期。培養(yǎng)后的光合細(xì)菌保存在?4℃條件下備用。

紅色非硫光合細(xì)菌富集培養(yǎng)基的配制:?NaHCO3?1.0?g;?NH4Cl?1?g;?K2HPO4??0.2?g;CH3COONa?1.0~5.0?g;MgSO4·7H2O?0.2?g;?NaCl?0.5~2.0?g;酵母浸汁0.1?g;微量元素10?mL。

將上述成分溶于蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH至7.0,定容1000?mL。在115℃下滅菌20?min。

光合細(xì)菌的分離與培養(yǎng)

①?液體富集培養(yǎng)基：CH3COONa?3.0?g?，CH3CH2COONa?0.3?g，NaCl?1.0?g，(NH4)2SO4?0.3?g，MgSO4·7H2O?0.5?g，K2HPO4?0.7?g，CaCl2?0.05?g，MnSO4?0.0025?g，FeSO4?0.005?g，酵母膏?0.1?g，谷氨酸?1.0?g，蒸餾水定容至?1?L，調(diào)?pH?至?7.4。

②?固體分離培養(yǎng)基：CH3COONa?3.0?g·L-1，酵母膏?3.0?g·L-1，CaCl2?0.3?g·L-1，MgSO4·7H2O?0.5g·L-1，瓊脂?20?g·L-1，調(diào)?pH7.4。

培養(yǎng)條件：取少量活性污泥樣品于裝有?120?mL?富集培養(yǎng)基的?125?mL?血清瓶中富集，置于光照培養(yǎng)箱中?30?℃培養(yǎng)，照度為?2000?1x。6~9?d?后，液體培養(yǎng)基變?yōu)榧t色，經(jīng)搖床振蕩稀釋處理后，涂布和劃線于平板固體培養(yǎng)基上，置于恒溫培養(yǎng)箱中黑暗好氧培養(yǎng)，7?d?后獲得單菌落。在平板固體培養(yǎng)基中重復(fù)劃線?3?次以上，直到在顯微鏡下觀察為純菌。

7、RCVBN擴(kuò)大培養(yǎng)基

優(yōu)化培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)采用RCVBN擴(kuò)大培養(yǎng)基,其組成為:CH3COONa?3.0g,?(NH4)2SO4?1.0g,?MgSO4?0.2g,?NaCl?1.0g,?KH2PO4?0.3g,?K2HPO4?0.5g,?CaCl2?0.05g,?酵母膏0.1g,?微量元素溶液1mL,?蒸餾水1000mL.

微量元素溶液為改良的Imhoff和Truper生長(zhǎng)因子溶液,其組成為:?EDTA-2Na?2g,?FeSO4·7H2O?0.2g,?MnCl2·4H2O?0.1g,?H3BO3?0.1g,?CoCl2·6H2O?0.1g,?ZnCl2?0.1g,?Na2MoO4·2H2O?0.02g,?NiCl2·6H2O?0.02mg,?CuCl2·2H2O?0.01g,?蒸餾水1000mL。

培養(yǎng)方法

在8個(gè)CSTR光合培養(yǎng)器中進(jìn)行分批培養(yǎng),培養(yǎng)器體積為50?L。培養(yǎng)器光照根據(jù)強(qiáng)度不同的需要分別由三只25W,40W,60W,100W白熾燈泡組合提供,培養(yǎng)器的底部設(shè)有穿孔曝氣管,根據(jù)DO含量間歇開啟,培養(yǎng)器內(nèi)設(shè)有溫控器。

8、光合細(xì)菌參考培養(yǎng)基

無(wú)水乙酸鈉5mg，氯化銨1.0mg，磷酸氫二鉀0.2mg，MgSO4·7H2O 0.2mg， 碳酸氫鈉1.0mg，酵母浸膏0.1mg，氯化鈉1.0mg調(diào)節(jié)pH為7.1-7.2, 1.05Mpa，121攝氏度滅菌20分鐘，固體培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加15-20%瓊脂

菌液味道辨識(shí)法
光合細(xì)菌重點(diǎn)為厭氣性種類，也有少許屬于兼氣性品種，它們地都可以在「有光無(wú)氧」地環(huán)境下被培養(yǎng)。在這里面又分自營(yíng)性種類，及異營(yíng)性種類，所以不見得所有地光合細(xì)菌都適合應(yīng)用于水族缸作為凈水制劑。
已知在水族缸地好氣環(huán)境中，只有兼氣異營(yíng)性地光合細(xì)菌（如紅螺菌科菌種）最適合作為凈水制劑。它地培養(yǎng)物通常是少許有機(jī)營(yíng)養(yǎng)液，而且培養(yǎng)完成之后，可以直接填充瓶封為商品。此種商品一旦開封之后，可以立即聞到一股惡臭，如果再加上顯色辨識(shí)，應(yīng)該很容易確認(rèn)。
反觀硝化細(xì)菌均為好氣自營(yíng)性種類，在它地菌液中，通常不能含有任何易分解地有機(jī)成分，否則不僅會(huì)立即遭致異營(yíng)性細(xì)菌地污染，連瓶封環(huán)境中地有限氧氣，很快就會(huì)被耗盡，使得硝化細(xì)菌因缺乏氧氣而無(wú)法長(zhǎng)時(shí)間生存在這里面。因此，凡是硝化細(xì)菌制劑，應(yīng)該是沒(méi)有明顯地臭味地。

光合硝化細(xì)菌制劑的迷失
光合硝化細(xì)菌菌制＝【光合細(xì)菌＋硝化細(xì)菌】地混合制劑？這種產(chǎn)品既然命名為「光合硝化細(xì)菌」，難道真有這種細(xì)菌存在？非也，這應(yīng)該只是商品名稱吧！可能指這種產(chǎn)品相應(yīng)情況下具有光合細(xì)菌及硝化細(xì)菌地雙重作用地效果。不過(guò)在網(wǎng)絡(luò)上有眾多人認(rèn)為，它真是一種光合細(xì)菌與硝化細(xì)菌地混合制劑。
光合細(xì)菌與硝化細(xì)菌在生態(tài)上是二種完全獨(dú)立，而且互不隸屬地細(xì)菌，它們不僅能源獲得不同，連營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)及呼吸代謝也有所差異，實(shí)在很難想象這二類細(xì)菌可以制成混合制劑，因此我們寧愿相信它只是商品名稱而已，而不必去過(guò)度濾揣測(cè)，它是否為光合細(xì)菌與硝化細(xì)菌地混合制劑。
眾多光合細(xì)菌（重點(diǎn)是自營(yíng)性）對(duì)氮源地利用較廣，一般可利用銨鹽、氨氮，甚至氮?dú)?，少?shù)還能利用硝酸鹽和尿素。因此在功能上多少也具有類似硝化細(xì)菌地除氨作用，也許因?yàn)槿绱?，聰明地生產(chǎn)廠家才把單純地光合細(xì)菌制劑以「光合硝化細(xì)菌」命名之，藉以增加銷路。不過(guò)相較于硝化細(xì)菌，這種產(chǎn)品地除氨效果不會(huì)較強(qiáng)，應(yīng)該可以被理解地，蓋氨為硝化細(xì)菌地維生地能源（耗量多），而非像光合細(xì)菌只是營(yíng)養(yǎng)成分而已（耗量少）。

結(jié)論
優(yōu)良地水質(zhì)是成功養(yǎng)殖地先決條件，而健全地微生物凈水系統(tǒng)又是確保優(yōu)良地水質(zhì)地基礎(chǔ)，所以對(duì)于如何建立有益微生物凈水系統(tǒng)，已經(jīng)成為我們必須去努力追求地目標(biāo)。在這個(gè)創(chuàng)建地過(guò)程中，凡能選用優(yōu)良地微生物制劑，以協(xié)助既有地微生物凈水系統(tǒng)能發(fā)揮更強(qiáng)大地功能，將水中有害物質(zhì)徹除。